1.2.- Microscopía confocal.
Fue creada por Marvin Minsky,quien estuvo estudiando el sistema nervioso, y quiso apreciarlo en varios niveles para comprender el funcionamiento neuronal. Para ello, él construyó un microscopio óptico, y fue mejorándolo a medida que iba encontrando fallos. En un principio los materiales situados por debajo y encima del plano de la muestra reflejarían, haciendo que esta se viera borrosa. Por ello, Minsky minimizó la difuminación de la imagen y reforzó el contraste evitando que se dispersaran en el objeto enfocado. Después lo llevó a la muestra, haciendo que esta fuera la más iluminada, y que reflejase más luz. Aún así, esto no impedía que la luz fuera devuelta. Nuevamente hizo otro cambio, poniendo un plano con un pinhole (una abertura muy pequeña), que hacia que la luz de retorno pasara a la superficie detectora. Al poco tiempo, la luz del tejido exterior al punto era iluminada.
Es un tipo de microscopio que consiente estudiar con un mayor contraste y claridad gracias a una fuente de luz de un láser. Este recoge y localiza la luz emitida por las moléculas fluorescentes puestas en la misma superficie. Permitiendo un avance enfocando los destellos de la lente en spécimens que son más gruesas que el plano focal y resoluciones microscópicas subcelulares. Dentro de los microscopios confocales nos encontramos con una pieza llamada pinhole, se encuentra como un orificio en el filtro detector de la luz que no deja pasar la luz de los planos no enfocados. De esta manera, se consigue observar solo el plano focal. Debido al uso del sistema eléctrico, se puede realizar cortes de manera virtual.
El único problema era que tan solo conseguía una imagen nítida de un punto, Parcialmente al plano entero, añadió una exploración secuencial por lineas paralelas. Enviando una secuencia mas clara a través del orificio filtrante hasta el detector, La luz que atravesara el orificio incidía en un detector fotomultiplicador. Este detector generaba señales eléctricas produciendo una imagen en un apantalla de larga persistencia, tomada por un rada. Aunque reproducir la muestra en pantalla grande, fue una mala idea, ya que no se diferenciaba nada. Pero en consecuencia, sus arreglos quedaron grabados en la historia con un nuevo microscopio, el confocal.
El microscopio confocal consta de múltiples partes, como son:
Su función es la mejora de la relación entre la señal y ruido de la imagen.
Además, permite el estudio de moléculas en una misma célula. Para diferenciarlo, utilizan fluorocromos con los que quedan heterogéneos. También podemos crear una reconstrucción por medio de una recolección de imágenes que permiten tratar digitalmente su construcción, gracias a las series Z. Ellas son las culpable de la captura del cambio de la molécula.
Otro uso es la observación de FRAP, consiste en dejarnos ver el movimiento intracelular por quemado, haciendo arder una zona con el láser confocal. La fluorescencia puede mostrar una recuperación, o un daño irreparable. El funcionamiento de esta técnica se debe a una molécula "donante" que es estimulada, mientras que excita a la "aceptora" para que esta produzca una fluorescencia localizable.
Además, permite el estudio de moléculas en una misma célula. Para diferenciarlo, utilizan fluorocromos con los que quedan heterogéneos. También podemos crear una reconstrucción por medio de una recolección de imágenes que permiten tratar digitalmente su construcción, gracias a las series Z. Ellas son las culpable de la captura del cambio de la molécula.
Otro uso es la observación de FRAP, consiste en dejarnos ver el movimiento intracelular por quemado, haciendo arder una zona con el láser confocal. La fluorescencia puede mostrar una recuperación, o un daño irreparable. El funcionamiento de esta técnica se debe a una molécula "donante" que es estimulada, mientras que excita a la "aceptora" para que esta produzca una fluorescencia localizable.
-Bibliografía:
2015. Madridorg. [Online]. [6 December 2015]. Available from:
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http://www.sebbm.es/web/es/divulgacion/rincon-profesor-ciencias/articulos-divulgacion-cientifica/319-uso-de-la-fluorescencia-y-la-microscopia-confocal-en-la-investigacion-cientifica
In-text citation: (737, 2015)
http://www.elementos.buap.mx/num18/pdf/35.pdf
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2015. Usales. [Online]. [7 December 2015]. Available from: http://cicwebserver.dep.usal.es/confocal/web/WEB/apartados web micro/aplicaciones confocal.dwt
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